本文学习费章军老师文章Genome of Solanum pimpinellifolium provides insights into structural variants during tomato breeding 如何鉴定SV。

其流程见 https://github.com/GaoLei-bio/SV

1 SV-calling

1.1 基因组间比较

简单思路: 2个基因组比较--》调取unique 比对--〉二代reads比对过滤

软件准备:

  • minimap2 (v2.11 or higher)
  • sam2delta.py (RaGoo 下的一个脚本,将sam格式变为nucmer的格式)
  • Assemblytics
  • samtools (v1.5 or higher)
  • blast+
  • python 2.7

    -- operator

    -- pathlib

    -- argparse

    -- os

    -- re

    -- subprocess

    -- sys

数据准备:

  • reference genome
  • query genome (二者质量较高,且相关物种;$\color{red}{染色体命名规则;xxxchr01, xxxchr02, contig等合并为 xxxchr00}$)
  • 两个基因组所对应的illumine reads (因为组装不完整,导致没有组装的区域被认为是delete,因此用二代数据过滤SV)
  • QryRead2Ref.bam (sorted, rmdup; query reads 比对到reference;$\color{red}{可以bwa-mem进行比对,名字必须是这个}$)
  • RefRead2Qry.bam (sorted, rmdup;ref reads比对到Query genome)
  • Ref_self.bam; 同上
  • Qry_self.bam; 同上

$\color{red} {上述4个bam文件必须sort,且去重复,index,且命名和上述统一,且均放于工作目录}$

简单操练一下:

将下载的所有脚本置于一个文件即可

## 运行SV_calling.sh 即可
Command:
bash path_to_SV_calling_script/SV_calling.sh \
path_to_SV_calling_script \
<Reference_genome_file> \
<Query_genome_file> \
<Prefix_for_outputs> \
<number of threads> \
<min_SV_size> \
<max_SV_size> \
<assemblytics_path>
### 具体数据
bash path_to_SV_calling_script/SV_calling.sh \
path_to_SV_calling_script \
SL4.0.genome.fasta \
Pimp_v1.4.fasta \
SP2SL 24 10 1000000 \
path_to_assemblytics_scripts ## 上述的4个bam文件必须放在当前工作目录下

结果:

  • SP2SL.Master_list.tsv
  • SP2SL.NR.bed (用于下一步)

1.2 pacbio reads进行鉴定SV (可选)

数据准备:

  • Prefix_for_outputs.NR.bed: 上一步结果
  • Reference_genome_file: fasta
  • Query_genome_file: fasta
  • Ref_base_pbsv_vcf (利用pbsv 将query pacbio reads比对到reference genome 获得SV)
  • Qry_base_pbsv_vcf (利用pbsv 将reference pacbio reads比对到Query genome 获得SV)

直接操练

  Command:
bash path_to_SV_calling_script/SV_PacBio.sh \
path_to_SV_calling_script \
<Reference_genome_file> \
<Query_genome_file> \
<Prefix_for_outputs> \
<number of threads> \
<Ref_base_pbsv_vcf> \
<Qry_base_pbsv_vcf> ## 具体例子
For example:
bash path_to_SV_calling_script/SV_PacBio.sh \
path_to_SV_calling_script \
SL4.0.genome.fasta \
Pimp_v1.4.fasta \
SP2SL 24 \
PimpReads2SL4.0.var.vcf \
HeinzReads2Pimp.var.vcf

结果:

  • SP2SL.Master_list.tsv

可将上述两种方法得到的SV结果进行合并即可。

2 SV-genotyping

主要程序 SV_genotyping.py, 且在Example中有实例文件

准备数据:

  • 重测序数据分别比对到Query 和Ref genome (bwa即可【️ bp错配】,去重复,)并排序
Parameters:
INPUT=Example/Example_SV.tsv # Path to your input SV file. A example of input SV file is provided.
sample=Sample_name # Sample name, prefix of outputs
Reference=Reference_genome # Path to Reference genome, fasta format, indexed by samtools faidx
Query=Query_genome # Path to Query genome , fasta format, indexed by samtools faidx
Ref_bam=Reference_base_bam # Sorted bam file with reads aligned on Reference genome
Qry_bam=Query_base_bam # Sorted bam file with reads aligned on Query genome
Mismath=3 # Allowed mismath percentage of aligned read ## 实例数据
python SV_genotyping.py Example/Example_input.tsv \
Example Example/Reference.fasta \
Example/Query.fasta \
Example/Sample.Ref_base.bam \
Example/Sample.Qry_base.bam 3

结果

  • Example.GT.txt.
head Example.GT.txt.
#Genotype: R for homozygous Reference genotype; Q for homozygous Query genotype; H for Heterozygous genotype; U for Undetermined.
SV_ID Example_1m
SV_w_5206 Q
SV_w_5207 Q
SV_w_5209 R
SV_w_5210 Q
SV_w_5211 Q
SV_w_5212 H
SV_w_5213 Q
SV_w_5214 Q

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参考

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