期刊名:J. Proteome Res

发表时间:(2019年8月)

IF3.78

单位:

  1. 上海第九人民医院药学系,上海交通大学药学院
  2. 上海交通大学药物与生物化学系

 

物种:人源A549细胞系

技术:代谢组学及转录组学

一、 概述:(用精炼的语言描述文章的整体思路及结果)

持续的顺铂(cisplatin,DDP)给药会诱发耐药性而影响药效,然后机制仍未明了。通过整合代谢组和转录组数据,以药敏A549细胞株和耐药A549/DDP细胞株作为材料去挖掘潜在的代谢机制及耐药相关的关键靶标。广泛分析的结果表明19种代谢物与顺铂耐药性有密切关联,如氨酰-tRNA的生物合成、甘油磷脂及谷胱甘肽的代谢等。进一步地,转录组分析表明谷胱甘肽代谢在耐药株A549/DDP中明显受影响,指示谷胱甘肽代谢在耐药进程中起了重要作用。此外代谢组分析也提示CD13, GPX4, RRM2B, 和OPLAH等4种谷胱甘肽代谢相关的酶是顺铂耐药的关键靶标。更进一步的研究确认该4种酶在A549/DDP中过表达。以上机制的挖掘及潜在靶标的发现能有助于了解人们顺铂的耐药性。

二、 研究背景:(简要介绍研究进展动态、研究目的和意义)

肺癌是世界上最高发的癌症,其中非小细胞肺癌(Non–small cell lung cancer ,NSCLC)占了85%的比例。顺铂由于其疗效显著,过去20年来作为一线化疗药物使用。然而由于顺铂耐药性的出现,化疗效果受限。因此探索该药耐药性的机制具有重要意义。

三、实验设计:

四、研究成果:(重点图表展示)

1、在A549细胞中E-Cadherin过表达,但p-/ERK1/2、p-/STAT3、 p-/AKT在A549/DDP细胞中显著上调。证实了A549/DDP细胞系持续顺铂抗药性的建立。

顺铂对A549和A549/DDP细胞的作用:(A)CCK8细胞活力测试;(B) A549和A549/DDP细胞显微图示例; (C)WB检测A549和A549/DDP细胞中有顺铂处理时E-Cadherin, p-/ERK1/2,p-/STAT3, p-/AKT的表达; (D)灰度分析条形图。

2、(A549 (-), A549 (+), A549/DDP (-), A549/DDP (+)等4个实验组在PCA分析中明显分离;进一步对代谢物进行PLS-DA分析发现两组有明显的区别且无重叠。

A549和A549/DDP细胞代谢概括:(A-B) (A549 (-), A549 (+), A549/DDP (-), A549/DDP (+)的4个分组的PCA散点图;(C-F) PLS-DA点图及置换分析结果。

3、与顺铂抗药性相关的潜在代谢通路

通过PLS-DA分析,比较A549和A549/DDP细胞中有显著区别的变量,发现19种相关的代谢物,其中16种下调而3种上调。同时,串联质谱所得离子碎片的信息输入HMDB和Metlin作进一步确证。热图显示相关的上调/下调的代谢物的通路,指明A549/DDP细胞中某些代谢进程的改变,包括酰基-tRNA生物合成, 谷胱甘肽代谢, 氮代谢, 甘油磷脂代谢, 苯丙氨酸, 酪氨酸和色氨酸生物合成, 丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等。在4个组中受影响的通路类似并彼此差异,尤其A549和A549/DDP细胞中谷胱甘肽代谢在有无顺铂处理时差异明显。RNA测序分析指示A549和A549/DDP细胞中转录的差异,996个基因在A549/DDP细胞中特异表达,15830个基因在A549和A549/DDP细胞中都有表达。进一步分析标明不同通路的转录受到调节,比如膀胱癌通路和谷胱甘肽代谢通路。总而言之,谷胱甘肽代谢在A549/DDP细胞中显著改变。

4、与顺铂耐药性相关的谷胱甘肽代谢通路改变

结合RNA测序的分析结果,遗传水平的CD13,GPX4, RRM2B,和OPLAH在A549/DDP细胞中显著上调,CD13,GPX4, RRM2B,和OPLAH在谷胱甘肽代谢通路中的作用如下图所示。这些关键酶蛋白水平的改变也在后续WB试验中得到确认。在A549和A549/DDP细胞中GPX4, RRM2B及OPLAH等3个蛋白的表达在给药顺铂后无显著差异。上述结果表明,顺铂耐药性可能主要由谷胱甘肽代谢通路调节中的CD13,GPX4, RRM2B和OPLAH介导。

5、通过靶标抑制和基因沉默恢复A549/DDP细胞的DDP敏感性

CD13,GPX4, RRM2B和OPLAH几个酶在药物代谢中的功能意义,通过化学剂抑制和基因沉默试验检测。如下图,顺铂和乌苯美司(CD13抑制剂)或者RSL(GPX4抑制剂)联合给药能够增强A549/DDP细胞的DDP敏感性。RRM2B和OPLAH敲除也会使A549/DDP细胞增敏。这些结果表明上述酶类可能是克服肺癌中顺铂耐药性的有效靶标。

文章亮点(与产品的结合点):

该文章整合了代谢组和蛋白组的数据,作为非靶标研究手段,对于发掘潜在的新目标行之有效。且结合统计学策略分析及通路分析,将发现的众多差异总结整合,能有效地概括关键的靶点。而且后期通过多种技术手段如WB等双重验证;加之基因沉默、抑制剂的使用进行回变验证,从不同角度、方向对组学发现的靶标进行严谨论证。是比较常用、完整充分的研究思路,值得学习借鉴。

阅读人:林山云

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